蟒蛇油产品：请认准 大蟒、海岛龙油、东盛弘、玉人来 几个商标
摘要:【目的】观察精制蟒蛇油对D一半乳糖所致衰老小鼠皮肤组织的延缓衰老作用｡【方法】选用昆明种小鼠,随机分为 蟒蛇油高､中､低剂量组( 中药高､中､低剂量组,剂量分别为1O､5 ､2.5 mL/kg) ,维生素E 组( 剂量为50 mg/只) . 模型组和正常对照组;除正常对照组外,其他组均采用颈背部皮下注射D一半乳糖( 剂量为1 g/kg) 法复制亚急性衰老模 型,同时各组皮肤涂布给药,连续42 d｡取各组小鼠背部皮肤检测含水量､超氧化物歧化酶( SOD ) 活力和丙二醛 ( MDA) 含量,并进行组织病理学检查｡【结果】模型纽皮肤含水量及SOD 活力降低,MDA 含量升高,与正常对照组比较 差异具有显著性意义(均 (P<0.01) );中药高、中、低剂量组及维生素E组均可升高皮肤含水量和SOD活力,降低MDA含 量,与模型组比较差异有显著性意义! ((P<0.01)) ,并可改善皮肤组织的病理形态变化。[结论】精制蟒蛇油具有一定延缓 皮肤衰老的作用,其机制与其能增加皮肤含水量和SOD 活力,降低MDA 含量有关｡
任 薇, 龙彦纲, 黄国鑫, 武 文, 梁海春, 赵学军, 苏子仁
(广州中医药大学新药开发研究中心,广东广州 510006 )
关键词:蟒蛇油/药理学; 皮肤衰老/中药疗法; 皮肤/病理学; 疾病模型,动物; 小鼠
蟒蛇油,为蟒科动物蟒蛇Python molurus bivittatus Schlegel 的脂肪｡《本草纲目拾遗》里又叫 蟒油,《调疾饮食辨》里称蚺蛇油｡蟒蛇油昧甘, 性平｡祛风,解毒,清热润肤｡蛇油的应用在我国 历史悠久,常用它治疗冻疮､皲裂､湿疹､烫伤等 皮肤疾患｡蛇油中含有多种人体必须的微量元素, 维生素E 及多种脂肪酸,这些物质对于促进皮肤新 陈代谢,保持皮肤滑润､细腻和弹性､增强皮肤生 理机能､防止皮肤衰老､提高皮肤的环境适应能力 有一定作用¨ ｡对于蟒蛇油抗皮肤衰老的实验研 究,尚未见报道｡本研究对蟒蛇油延缓皮肤衰老的 作用进行探讨,现报道如下｡
l 材料与方法
1.1 动物 昆明小鼠,体质量( 20 ±2 ) g,雌雄 各半,SPF 级,由广州中医药大学实验动物中心提 供,合格证号:0043452｡
1.2 药物､试剂与仪器 精制蟒蛇油由广州中医 药大学新药开发研究中心提供,批号:20090701, 纯度100%;维生素E 由广州星群药业股份有限公 司生产,批号:Ge50008 ;D.半乳糖由上海市晶纯 试剂有限公司生产,批号:18565 ;生理盐水由佛 山双鹤药业有限责任公司生产,批号:0909204D ;超氧化物歧化酶( SOD) 试剂盒由南京建成生物工 程研究所提供,批号:20 100115 ;丙二醛( MDA) 试剂盒由南京建成生物工程研究所提供,批号: 201001 15 ｡BSA224S—CW 型( 万分之一) 电子天平 由北京赛多利斯科学仪器有限公司提供;DHG. 907A 型电热恒温鼓风干燥箱由上海精宏科技有限 公司提供;G7.953T 型组织匀浆机由德国FLUKO, Digital Homogenizer 提供;722 型分光光度计由上海 精密科学仪器有限公司提供;DDL一5 低速冷冻离心 机由上海精密科学仪器有限公司提供｡
1.3 分组与造模 将72 只小鼠随机分为中药高､ 中､低剂量组,模型组,正常对照组,维生素E 组,每组12 只｡每日颈背部皮下注射125 mg/L D一 半乳糖1 g/ ,连续注射42 d 复制亚急性衰老模 型 j ,正常对照组注射等容积的生理盐水｡
1.4 给药方法 造模的同时给药,用80 L 硫化 钠酒精溶液脱毛法 背部脱毛( 2 em ×3 em) ,中 药高､中､低剂量组分别给药l0 ､5 ､2.5 mL/kg , 维生素E 组50 mg/只,模型组和正常对照组给予 生理盐水5 mL/kg,皮肤涂布给药,连续给药42 d｡ 实验过程中,每天记录小鼠表征和活动情况｡末次 给药1 h 后颈椎脱臼处死小鼠,取背部正中皮肤 (1 ~cm^{2}) 1 cm 大小,迅速放人体积分数20%福尔马林液中固定,拟作组织切片,进行组织形态学观察;另取 (1 ~cm^{2}) 1 cm 左右的皮肤供测定皮肤含水量之用;余背部 皮肤取下后作皮肤组织匀浆测定皮肤生化指标之用｡
1.5 皮肤含水量测定 颈背部皮肤去毛清洁后, 切取 (1 ~cm^{2}) 皮肤,精密称其湿质量,随即将其放入 烘箱中,于8O℃烘干12 h,称其干质量,计算皮 肤含水百分率: (p_{金水 }(\%)=(m_{碰 }-m_{千 }) / m_{碰 } \times) 10 0%｡
1.6 皮肤匀浆生化指标测定 取脱毛背部皮肤组 织0.5 g 左右,经预冷生理盐水漂洗,除去皮下脂 肪和其他结缔组织,滤纸拭干,称其质量,量取该 组织块9 倍质量预冷生理盐水,先取2/3 量倒入装 有组织块烧杯中,剪碎组织块后倒人匀浆管中,将 剩余1/3 生理盐水冲洗烧杯壁,采用内切式组织匀 浆机制成100 L 组织匀浆( 在冰水中进行) ,反 复冻融3 次,使细胞完全破碎,内容物全部游离在 液相中｡参照试剂盒说明书方法测定SOD 活力和 MDA 含量｡
1.7 皮肤组织形态学观察 按常规石蜡包埋切片, 苏木素一伊红( HE ) 染色法制作皮肤组织病理切 片,镜下分析不同组别皮肤内部组织形态学变化特 点｡主要观察指标:表皮厚度( 垂直于表皮基底 层至角质层的长度) ,细胞层数,基底层细胞排列 分布及形态,真皮层成纤维细胞的形态,汗腺､皮 脂腺､毛囊形态及数目｡
1.8 统计学方法 采用SPsS 13.0 统计软件进行数据的统计分析｡所得数据用均数±标准差(x ± ((\bar{x} \pm) s) 表示,多个样本均数的比较采用单因素方差分 析( One—Way ANOVA) ,当总体方差齐时选择LSD 法分析,当方差不齐时选择Dunnet C 法分析｡
2 结果
2.1 各组皮肤含水量测定结果 表1 结果显示: 模型组皮肤含水量减少,与正常对照组比较差异具 有显著性意义 ((P<0.01)) ,提示造模成功;所有 给药组与模型组比较差异具有显著性意义(P < ((P<) (0.01) 0.01) ,表明蟒蛇油具有保持皮肤组织水分的作用; 中药高剂量组与维生素E 组比较差异无显著性意 义 ((P>0.05)) ,提示高剂量蟒蛇油与阳性对照药 维生素E 效果相仿,能够使衰老皮肤的水分含量 恢复到正常水平｡
2.2 各组皮肤生化指标含量测定结果 表1 结果 显示:模型组SOD 活力显著下降,MDA 含量显著 升高,与正常对照组比较差异有显著性意义(P < ((P<) (0.01) 0.O1) ,提示衰老模型造模成功;所有给药组与模 型组比较,SOD 活力均显著增高,MDA 含量均显 著降低 ((P<0.01)) ,表明蟒蛇油能显著提高衰老 小鼠皮肤中SOD活力,同时降低MDA 含量,有效 延缓皮肤衰老;中药高剂量组与维生素E 组比较 差异无显著性意义 ((P>0.05)) ,提示高剂量蟒蛇 油与阳性对照药维生素E 效果相仿,能够使衰老 皮肤的SOD 和MDA 含量恢复到正常水平,有效对 抗和延缓皮肤衰老｡
表1 各组小鼠皮肤含水量､S OD 活力与MDA 含量比较( ± )
| 组 别 | $ N $ | P含水/% | $J\_{SOO} /(U \cdot mg^{-1})$ | $c\_{MDA} /(nmol \cdot mg^{-1})$ |
|---|---|---|---|---|
| 正常对照组 | $12$ | 76.04 \pm 5.20 | 2. $722 \pm 0.313$ | $1.247 \pm 0.196$ |
| 模型组 | $12$ | $61.96 \pm 4.25^{\oplus}$ | $1.857 \pm 0.162^{\oplus}$ | 3. $893 \pm 0.230^{\oplus}$ |
| 维生素 $E$ 组 | $12$ | 72.10\pm 3.68 | 2.466 \pm 0.450 | 1.356 \pm 0.257 |
| 中药高剂量组 | $12$ | 75.31 \pm 5.38 | $2.582 \pm 0.230^{2}$ | 1.395 \pm 0.092 |
| 中药中剂量组 | $12$ | $69.36 \pm 1.93^{2}$ | 2. $367 \pm 0.203^{2}$ | 2. $393 \pm 0.192^{2}$ |
| 中药低剂量组 | $12$ | 67.16 3.27 | 2.228 \pm 0.178 | 3.064 $\pm 0.251^{2}$ |
1 ((1) P<0.01) ,与正常对照组比较; ((2) P<0.01) ,与模型组比较
2.3 各组小鼠皮肤组织形态学观察
图1 ( 见彩图页第336 页) 结果显示:正常对 照组小鼠皮肤形态正常,层次清晰,结构完好,胶 原纤维排列紧密;衰老模型组小鼠表皮变薄,细胞层数减少,基底细胞排列疏松紊乱,真皮变薄,表 皮突消失,胶原纤维减少,分布不均,排列不规 则,皮下结构疏松,毛囊数目减少;中药低剂量组 小鼠表皮厚度和细胞层数有所增加,排列较为规则,毛囊数有所增多;中药中剂量组小鼠表皮变 厚,真皮层胶原纤维排列较规则,弹性纤维增多, 纤维细长,分布于胶原纤维之间;中药高剂量组小 鼠表皮细胞层数增加,真皮层显著变厚,胶原纤维 粗大,排列紧密,弹性纤维细长,弯曲,交织成 网,毛囊数明显增多;维生素E 组小鼠表皮细胞 和真皮层显著变厚,胶原纤维排列规则紧密,毛囊 数明显增多｡
3 讨论
皮肤衰老是内源性生理衰老和外源性环境因素 共同作用的结果,内源性衰老是根本,环境因素是 在内源性衰老的基础上起加速或延缓作用 j ｡皮肤 衰老的特征是皮肤失去弹性,出现皱纹､干燥角 化､色素过度沉积等｡皮肤的老化涉及多种形态与 代谢活动的改变｡随着年龄增长,皮肤中胶原合成 及胶原翻译后加工有关的酶减少,胶原合成与酶的 活性逐渐降低;此外,皮肤的血液供应随老化而减 少,因而皮肤变得干瘪粗糙,表皮与真皮的连接变 薄,而导致对机械力的抵抗性减弱;再则,老年人 皮肤缺乏炎症细胞与肥大细胞,所以对疾病的抵抗 力下降 ｡随着年龄的增长,皮肤逐渐衰老呈必然 趋势｡
在皮肤衰老过程中,自由基是皮肤损害的一个 重要因素｡机体内自由基产生与消除的动态平衡被 破坏时,自由基防御酶,如SOD 活性将会降低, 导致过量自由基产生 ｡自由基是衰老的重要启动 因素,具有极强的氧化能力,可使生物膜中不饱和 脂类发生过氧化,形成脂质过氧化物,其终产物 MDA 是强交联剂,易与蛋白质､核酸或脂类结成 难溶性物质,导致生物膜硬化,细胞破裂死亡 ｡ SOD 是体内唯一的以超氧化自由基为底物的金属 酶,是超氧化自由基有效清除剂｡在正常生理情况 下,SOD 能有效清除并阻止超氧化自由基连锁反 应,维持自由基清除和产生的动态平衡,保护皮下 组织免受自由基的损害,从而起到延缓皮肤衰老的 作用 ｡因此,增强自由基防御酶的活性,减少皮 肤自由基的生成,对已生成的自由基进行有效清 除,可有效减缓皮肤的衰老｡
水分是皮肤表皮角质层重要的塑形物质之一, 增龄使角质层变薄,自然润泽因子含量不断减少, 皮肤水合能力降低,细胞组织皱缩老化,出现组织 学结构和形态学改变而使皮肤出现细小皱纹 ｡有 研究发现,面部小皱纹是由于皮肤表皮和真皮暂时
缺水,一旦得到充足的水分,小皱纹即会消失 ｡ 因此,测定皮肤组织中水分含量以及SOD 活力和 MDA 含量变化可作为判定受试动物皮肤衰老程度 的一个特殊而敏感的指标｡
D一半乳糖所致的小鼠衰老模型是根据衰老代谢 学说研制的衰老模型,可导致肝､脑､心等内脏器 官的衰老l1 一｡研究证明D一半乳糖诱导的亚急性 衰老模型是可靠的衰老实验动物模型u ｡因此, 本研究采用D一半乳糖复制小鼠衰老模型｡在该模 型中所得的实验结果表明:蟒蛇油能显著提高衰老 小鼠皮肤中水分含量和SOD 活力,降低衰老小鼠 皮肤组织中MDA 含量,提示这可能是蟒蛇油能够 延缓皮肤衰老的机制,且与公认的抗氧化剂维生素 E 比较具有相仿的抗衰老作用｡
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(英 文 摘 要 见 259页 )
精制蟒蛇油延缓肤衰老的实验研究：https://www.python.hn.cn/4188.html
