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摘要 目的:考察蟒蛇活性肽抗氧化作用,为其深入开发提供科学依据｡方法:以蟒蛇蛋白水解肽为原料, 以Vc 为对照,采用清除羟自由基作为抗氧化性的评价指标,研究蟒蛇活性肽的体外抗氧化活性｡结果:随着蟒 蛇活性肽浓度的增加,其羟自由基的清除能力增大,半数清除率质量浓度为4.82 mg/mL｡结论:蟒蛇活性肽具 有较好的抗氧化能力｡
作者：高颖、孙佳明、张辉
单位：长春中医药大学，吉林长春130117
关键词：蟒蛇；活性肽；抗氧化
引言：蟒蛇是蟒蛇科动物，蟒蛇肉在《名医别录》中已有记载，具有祛风活络、杀虫止痒等功效。近年来，利用现代酶工程技术，通过选择适当的蛋白酶进行水解，可以制备各种各样具有显著抗氧化作用的生物活性肽。本研究以蟒蛇活性肽为原料，对其进行体外清除羟基自由基（·OH）活性研究，为开发具有抗氧化功能的保健食品奠定基础。
生物活性肽一般由3 20 个氨基酸构成的多肽 类物质,不仅具有营养价值,而且在人体代谢吸收过 程中参与机体免疫调节､降低血压､促进矿物质吸收, 调节神经和抗菌等l_lj,具有重要的生理功能｡近年 来,利用现代酶工程技术,通过选择适当的蛋白酶进 行水解,可以制备各种各样具有显著抗氧化作用的生 物活性肽｡蟒蛇(Python rnolurl2&)是蟒蛇科动物,蟒蛇 肉在《名医别录》中已有记载,其“味甘,性温,有小毒｡ 除手足风痛,杀三虫,去死肌,皮肤风毒疠风,疥辟恶 疮｡”具有祛风活络,杀虫止痒功效,用于风痹瘫痪,疥 廨恶疮等证的治疗｡蟒蛇肉多被用于除疳疮,辟瘟疫 瘴气｡同时其也是一种营养价值很高的食物,具有舒 筋活络､滋补身体之功效_3 J｡近年来,对蟒蛇活性肽 抗氧化活性未见报道｡本研究以蟒蛇活性肽为原料, 对其进行体外清除羟基自由基( ·OH)活性研究,为具有抗氧化功能的保健食品的深入开发奠定基础,进而 可带动蟒蛇养殖和深加工等产业化规模,创造更大的 经济效益和社会效益｡
1 实验材料
1.1 材料与试剂 蟒蛇活性肽为由长春中医药大学 研发中心提供;邻二氮菲､无水乙醇､磷酸二氢钠等试 剂均为国产分析纯试剂｡
1.2 主要仪器与设备 超级恒温槽,上海精密仪器 有限公司;高速离心分离机,上海手术机械厂;电子天 平,梅特勒一托利多仪器(上海)有限公司;LXJ II 型离 心机,上海医分仪器制造有限公司;UV mini 1240 紫 外可见分光光度计,13 本岛津公司｡
2 实验方法
2.1 羟基自由基溶液配制 邻二氮菲溶液的配制: 配制8O mmol/L 邻二氮菲(1,10.phenanthroline)无水乙醇溶液(取0 .007 45 g,溶解于0.5 —IlL 无水乙醇中) , 使用时以蒸馏水稀释100 倍｡
0.01% (H_{2} O_{2}) 的配制:取16.7L的 (H_{2} O_{2}) 于50mL 容量瓶中,加蒸馏水定容至刻度,摇匀,即可｡
PBS(0 .2 mol/L,pH 7.37)的配制:精密称取0 .528 2g磷酸二氢钠 ((NaH_{2} PO_{4})) 和5.807 7g磷酸氢二钠 ((Na_{2} HPO_{4})) 置容量瓶中,蒸馏水定容至200ml,摇匀, 测pH 为7 .37 ,即得｡
硫酸亚铁 ((FeSO_{4} \cdot 7 H_{2} O)) 00.75 mml/L的配制:精 密称取0.012 0 g FeSO4·7 H2O 于50 mL 容量瓶中,蒸 馏水定容至刻度,即可｡
硫酸亚铁和 (H_{2} O_{2}) 要现用现配。
2.2 供试样品 用蒸馏水溶解蟒蛇酶解肽,配制成 10 ms/mL 的样品用于测定羟基自由基清除率｡
2．3 羟基 自由基清除活性的测定方法 采用邻二氮于试管中依次加入2 mLPBS (0.2 mol/L,pH7 .37) 和 1 m睐馏水,充分混匀后,加入0 .75 mmol/L 硫酸亚 铁 ((FeSO_{4} \cdot 7 H_{2} O)) 1 ml,混匀后,加入0.01%双氧水 ((H_{2} O_{2}) 1 ~mL) ,于37℃水浴60 min,在510mm测其吸光 度值,所测得的数据为损伤管的吸光度值A(损)｡未 损伤管以l mL 蒸馏水代替损伤管中的1 mL 0.01% 的双氧水 ((H_{2} O_{2})) ,操作方法同损伤管,可测得510nm 未损伤管的吸光度值A(未)｡样品管以已经补足至 l mL的样品代替损伤管中的1 n1I蒸馏水,操作方法同 损伤管,可测得510 am样品管的吸光度值A(样)｡ 各样品管中加入的溶剂如下:
[\begin{aligned} & A( 损) : 邻 (1 mL)+PBS(2 mL)+H_{2} O(1 mL)+Fe- \ & \cdot 7 H_{2} O(1 mL)+H_{2} O_{2}(1 mL) \end{aligned}]
[A( 未) : 邻 (1 mL)+PBS(2 mL)+H_{2} O(1 mL)+Fe-]
[SO_{4} \cdot 7 H_{2} O(1 mL)+H_{2} O(1 mL)]
A(样) :邻(1 mL) + PBs(2 mL) + 样品(1 mL) +
[FeSO_{4} \cdot 7 H_{2} O(1 mL)+H_{2} O_{2}(1 mL)]
[羟自由基清除率 D(\%)=[A( 样 )-A(损 )] × 100 \%]
菲- (Fe2+) 菲一Fe2 氧化法[引｡取0 .80 mmol/L 邻二氮菲1 mL ∞∞∞ ∞∞∞∞∞ O
3 结果
OH 是已知的最活泼活性氧自由基,也是毒性 最大的氧自由基｡蟒蛇活性肽对· OH的清除作用结 果如图1 所示｡在试验浓度范围内,随着质量浓度的 增大,其清除能力也逐渐增强｡为量化比较蟒蛇活性肽清除·OH活性的大小,将蟒蛇活性肽配制成不同 质量浓度的溶液,测定其对·OH的清除率,绘制清除 率对底物浓度曲线,由此计算出清除率为50%时活 性肽溶液的质量浓度值即 (IC_{50}) 值。 (IC_{50}) 值越小,蟒蛇 活性肽的清除· OH 能力越强,抗氧化能力也越强｡ 经测定得到蟒蛇活性肽清除羟自由基的ICso值为 (IC_{50}) 值为 4.82mg/ml,同法测得Ve的 (IC_{50}) 值为0.35 mg/m。
图1 蟒蛇活性肽对羟基自由基的清除能力
4 结语
通过邻二氮菲- (Fe^{2+}) 氧化法测定蟒蛇活性肽对 羟自由基的清除作用,结果表明蟒蛇活性肽有良好的 清除羟基自由基能力｡其对羟自由基的清除作用呈 现明显的量效关系,其 (IC_{50}) 为4.82mg/ml。蟒蛇活性 肽可以有效降低体内自由基含量,从而减少自由基对 机体的损伤,说明蟒蛇活性肽是一种具有抗氧化保健 功能的食品｡
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作者简介：高 颖(1974一)，女，硕 士，副教授。研 究方
向：中药与天然药物化学研究。
*通 信作 者 ：张 辉 ，
蟒蛇活性肽抗氧化作用的研究：https://www.python.hn.cn/4196.html
