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摘要：本文应用高效液相色谱(HPLC)分离出眼镜蛇油中22种脂肪酸，并作了定性定量分析，为开发利用眼镜蛇油提供了依据。
眼镜 蛇 Naja naja(L·)以其垒体入药，有通经络，祛风湿的功效 。本实验测定了眼镜蛇油中的脂肪酸种类井进行了定性和定量分析 ，为将来开发利甩眼镜蛇油提供依据 。
眼镜蛇油脂肪酸测定
摘要：本文应用高效液相色谱(HPLC)分离出眼镜蛇油中22种脂肪酸，并作了定性定量分析，为开发利用眼镜蛇油提供了依据。
作者：卢锦琪（中山大学化学系）
实验相关的部分
仪器和试剂
1．仪 器： 日本 ShimadruLe-4A 高 效液相色谱仪，STL-1A型进样 阀，CTO-2AS型恒温箱 ，SPD--1型紫外检 测器 ，R-112M型记录仪 。
2．试剂：氢氧化钾／甲醇 液 (10 )，无水硫酸钠(A．R)，三己胺 (A．R，重 蒸馏 )，溴苯己酮 (A．R，用 正 己烷重 结晶 )，丙酮 (A．R )。
方法
1．眼镜 蛇油脂肪酸的提取将眼镜 蛇的脂肪除去纤维，洗净晾干 、剁碎，然后甩石油醚水洽加热回流萃取几次 ，至石油醚抽提液无 明显的颜色为止。合并抽提液，过滤 ，滤液用饱和NaCI溶液洗涤两次 ，再用水洗两次，用无水Na。SO．千燥 。水浴垒部蒸去石油醚 ，得到黄色透 明的眼镜蛇油 。将 KOH／CH。OH 溶 液 (1O )加入眼镜蛇油中，加热回流3小 时，冷却抽滤 ，将滤液蒸去约半量甲醇 ，加入蒸馏永稀释 ，再加入乙醚革取，水层用 己醚萃取两次 ，合并萃取被 ，东洗醚层至中性 (此 部分为非皂化部分 )。将水层用 稀HCI调至pH2，用乙醚萃取几次， 合并醚层水洗至中性 ，用无水NaSO干燥 ，得黄色透明液。水浴蒸去乙醚 ，得黄色透明的脂酸。
2. 样品预处理
取40mg 脂肪酸,加入4ml 三乙胺丙酮液 ( 10mg/m1) 及4ml 涣苯乙酮放 1:ra g/m1) , 放置过夜,使之生成其有紫外吸收的脂肪酸苯 乙酮酯｡
3. HPLC分离条件
使用美国Dupont 公司出产的ZORBAX ODS ( 4.6ra m ×25,cm ) 反相高效液枢色谱 柱,甲醇一永作流动相,检测波长 (\lambda=254 ~nm) , 找出最佳的分离条件( 见图) ｡
图 艰镜蛇油脂肪醴荤Z 酮酯的HPLC 谱固 色谱奈件:Z OR BA X OD S (0 4.6ra m x 25cm) (CH_{3} OH: H_{2} O=91: 9) , (\lambda=254 ~nm) , (流速 F=1.0 ml /) min一甄连= 5ram/min.Ra nge16,连样量2Ⅲ
结果与讨论 如蛐 5 :
在最佳 离条件下,用正癸酸､棕榈酸､ 肉豆蔻酸､硬脂酸､油酿的苯乙酮酯丙酮液分 别进样,从保留时间分别定.性出峰2 ､9 ､ 16､17 ､21所代表舶脂肪酸组份｡在眼镜蛇油 脂肪酸苯乙酮酯的HPLC 图谱中可以看出, 各峰是按从碳数小到碳数大的顺序排列的( 古 不饱和碳碳键的除外) ｡由于标样品种不多,故 我们参考Richard E Bot ch 的脂肪酸苯乙酮酯 的标准谱图“ ,大致估计出各峰所代表的脂肪酸组份｡进一步的实验可以收集各峰的洗脱 液,浓辅之后,用NMR确定各峰,这部分工作有待后进行｡
用HPLC 对眼镜蛇油脂肪酸苯乙酾酯进 行分离,可以分出22个组份,并利用峰面积归一 化法,算出各组份的百分含量( 见表) ｡但由于仪器的检测灵敏度较低,有些含量很低的组 O 6 5 t 6 0 8 4 1 5 O O O 8 6 0份可能没有被检测出来,而一些小峰面积又难 鲫∞ ∞虹曲 呻∞ 以计算,且由于标样品种不多,我们不能测出 各组份的校正因子f ,因而只能用峰面积归一 化法,致使实验产生误差｡但通过本实验,我 们大致上了解了眼镜蛇油中脂肪酸的种类及含 量,可作为今后开发利用的依据｡
表 跟镜蛇油脂肪酸成分曩百分含量
| 峰号 | 保留时间（分·秒） | 碳数和饱和度 | 百分含量（%） |
|---|---|---|---|
| 1 | 5'15" | 未确定 | 0.224 |
| 2 | 6'7" | C10:0 | 0.532 |
| 3 | 9'46" | C12:0 | 1.380 |
| 4 | 10'43" | C14:1 | 0.157 |
| 5 | 11'11" | 未确定 | 0.179 |
| 6 | 12'35" | 未确定 | 0.181 |
| 7 | 13'53" | 未确定 | 0.101 |
| 8 | 14'48" | C18:3 | 1.850 |
| 9 | 15'33" | C14:0 | 2.670 |
| 10 | 16'48" | C16:1 | 5.620 |
| 11 | 18'9" | C20+4 | 1.060 |
| 12 | 19'37" | C18:2 | 15.600 |
| 13 | 20'45" | C15:0 | 0.569 |
| 14 | 21'38" | 反式C18:2 | 0.491 |
| 15 | 23'13" | C20:3 | 0.629 |
| 16 | 26'21" | C16#0 | 13.000 |
| 17 | 28'3" | C18:1A⁹A¹[ | 46.800 |
| 18 | 29'36" | C18:148 | 0.483 |
| 19 | 32'20" | C20:2A¹1、14 | 0.420 |
| 20 | 33'40" | C17:0 | 0.298 |
| 21 | 41'8" | C18:0 | 2.170 |
| 22 | 43' | C20:1411 | 0.585 |
致谢 奉实验是在中山尢学化学粟副主任邓芹英教授指 导下完成· 井得到中心实验室集军老师的大力帮助｡
参考文越：
[ 1 ] R icha rd F .B ot ch :A nal C hem ｡4 7 ( 4 ) ,1 976
眼镜蛇油脂肪酸含量测定：https://www.python.hn.cn/4246.html
